▣ Application
High throughput and efficient CRISPR/Cas9-based mouse genome editing by RNA electroporation to zygote.
Fgf10 gene knockout mouse by Cas9 mRNA/gRNA electroporation
Fgf10 monozygous mutant embryo have an easily detectable limbless phenotype. Electroporation of Cas9 mRNA (Cas9 Protein) and gRNA enables genome editing of Fgf10.
◈ Zygote genome editing을 위한 Electrodes
강화 유리에 platinum plate electrode가 장착된, LF501PT1-10은 5 uL electroportion buffer에 있는 약 40개의 mouse zygotes까지 잡을 수 있고 electroporation으로 CRISPR/Cas9을 사용하여 효율적이고 high throughput zygote genome editing을 할 수 있음
◈ Electroporation과 Microinjection 비교
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Electroporation |
Microinjection |
Pre-operation | Not necessary | Preparation of injection and hold pipettes, etc. |
Required time for 100 zygotes |
~ 5 minutes |
> 2 hours |
Viability (after E15) |
40 ~ 80% |
10 ~ 50% |
Efficiency |
Same as microinjection |
Depends on the sequence |
Required skills |
Not necessary |
Manipularion of single zygotes |
Required amount of Cas9 mRNA | 500 ~ 2,000 ng | 50 ~ 500 ng |
√ 대부분의 zygotes가 microinjection보다 electroporation에 의해 한번에 처리될 수 있음
√ 처리된 zygotes의 viability는 microinjection에서 보다 electroporation에서 훨씬 더 높음
√ injection 기술을 익히는데 시간이 걸리는 microinjection과 비교하여, electroporation을 위한 특별한 기술이 필요 없음
⇒ Electroporation이 CRISPR/Cas9 system으로 high throughput mouse zygote genome editing을 위한 이상적인 방법